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想保护好徕卡显微镜,除了做包裹还需做机械维护

点击次数:73 发布时间:2020-04-07
  徕卡显微镜包裹的目的是为了防止超薄切片在制备过程中被破坏。这一步对于显微镜分散的细胞样品尤其必要。
 
  显微镜用于包裹的物质有明胶,白蛋白,甲基纤维素、蔗糖等。
 
  下面以白蛋白为例,说明其具体方法:
 
  1、在一聚乙烯塑料管中加入牛血清白蛋白(BSA),BSA溶于0. lmol/L的磷酸缓冲液中,pH7,浓度为10%^-20%。
 
  2、将经固定的组织块表面的残余液体用滤纸吸干,并迅速投入BSA中。
 
  3、显微镜一面振动塑料管,一面向其中逐滴加入25%的戊二醛,使管中戊二醛的最终浓度为2.5%。
 
  4、在上述条件下,BSA约在半分钟左右即可被戊二醛交连(聚合),显微镜用保险刀片将塑料管壁切除。把聚合的BSA切成小方块,使其大小略大于包埋于其中的组织块。
 
  如果样品是游离细胞,可按下述步骤包裹:
 
  1、将BSA加入一离心管内,显微镜浓度与上同;
 
  2、把经过固定的细胞转入离心管;
 
  3、在冷冻离心机上离心10分钟,800g, 40C;
 
  4、去掉上清,数码显微镜在管底沉淀上加一滴用0. lmol/L磷酸缓冲液配制的10%的戊二醛,使残余的BSA交连;
 
  5、用针把聚合后的团块拨起,切成小块。
 

  为防止显微镜冷冻时生成大的冰晶而使结构破坏,组织需经冷冻保护剂处理,常用的冷冻保护剂有甘油(30%),DMSO (20%)和蔗糖(2.3mol/L),均用缓冲液配制,显微镜组织在冷冻保护剂中浸泡的时间为0.5-1小时(室温)或过液((400)
 
  为防止大的冰晶产生,数码显微镜除使用冷冻保护剂外,应采取速冻的办法,其基本要求与具体作法和冷冻断裂与蚀刻时相同,即将经数码显微镜冷冻保护的组织块投入用液氮冷却的氛里昂12内。
 
  徕卡显微镜机械维护:
 
  使用防尘罩是保证显微镜处于良好机械和物理状态的最重要的因素。外壳如有污迹,能用乙醇或肥皂水来清洁(无用其他有机溶剂来清洁),但切勿让这些清洗液渗入内部,造成内部电子部件的短路或烧毁。
 
  保持使用场地的干燥,尽管每台徕卡显微镜均采用了特殊的防霉处理工艺,但当它长期工作在湿度较大的环境中的话,还是容易增加霉变的几率,因此如显微镜不得不工作在这些湿度较大的环境中,建议使用去湿机。
 
  另外,如发现光学元件表面有雾状,霉斑等不良情况时,请立刻联系徕卡专业人士,对您的仪器进行专业维护保养。
 
  建议
 
  采取下列措施,或许能更好的延长您的显微镜使用时间并使之保持良好的工作状态。
 
  (1)每次关闭电源前,请将灯光调至最暗。
 
  (2)关闭电源后,请等灯箱完全冷却后(约15分钟后),在罩上防尘罩。
 
  (3)开启电源后,若暂时不使用,可以将灯光调至最暗,而无需频繁开关电源。
 
  显微镜工作一年后,应该每年至少做一次的专业维护保养。